English | 设为首页 | 加入收藏
  HUCEC人正常宫颈上皮细胞】 【GAI】 【600823_ 世茂股分半年报.p】 【20批次备晒类装扮品吧嗒检
当前位置: 主页 > 日博官网 >

HUCEC人正常宫颈上皮细胞

时间:2019-12-31 00:14来源:原创 作者:admin 点击:
细胞称号:HUCEC人正常宫颈上皮细胞 培养条件:DMEM+10% FBS;37℃,5% CO2 发展形状:贴壁 细胞培养步调 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备培养基;北美胎牛血清,10%;双抗1%。

  细胞称号:HUCEC人正常宫颈上皮细胞

  培养条件:DMEM+10% FBS;37℃,5% CO2

  发展形状:贴壁

  细胞培养步调

  一.培养基及培养冻存条件准备:

  1) 准备培养基;北美胎牛血清,10%;双抗1%。

  2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮贮存。

  二.细胞处理:

  1) 苏醒细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇晃解冻,参与4mL培养基混淆平均。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将一切细胞悬液参与培养瓶中培养住宿(或将细胞悬液参与10cm皿中,参与约8ml培养基,培养住宿)。第二天换液并检查细胞密度。

  2) 细胞传代:假设细胞密度达80%-90%,便可停止传代培养。 关于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  1. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下不美观察细胞消化状况,若细胞大年夜局部变圆并寥落,敏捷拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加大年夜批培养基终止消化。

  2. 按6-8ml/瓶补加培养基,悄然打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

  3. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或许瓶中。 细胞冻存:待细胞发展形状优胜时,可停止细胞冻存。 下面T25瓶为例;

  1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后参与1ml胰酶,细胞变圆寥落伍,参与2ml完整培养基终止消化,可应用血球计数板计数。

  2.1000RPM离心5分钟去掉落上清。用血清重悬浮,加DMSO至终究浓度为10%。参与DMSO后敏捷混匀,按每1ml的数量分派到冻存管中,留心冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数量大年夜于1X106个细胞冻存。

  3.将冻存管置于依次降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌贮存。记录冻存管位置以便下次拿取。

  留苦衷项:

  1. 收到细胞后起首不美观察细胞瓶可否完整,培养液可否有漏液、混浊等现象,如有上述现象爆发请及时和我们联系。

  2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h摆布),动摇细胞形状,切忌在温箱内静置住宿。

  3. 静置后镜检,摄影,记录细胞形状。建议传代后也摄影记录细胞发展状况。

  4. 贴壁细胞:若细胞密度超越80%,可正常传代;若未超越80%,汇集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%摆布再传代,瓶盖可稍微拧松。(责任编辑:admin)

  • 上一篇:GAI
  • 下一篇:没有了